Недавно главный государственный санитарный инспектор Нурмат Отабеков во время одного из брифингов заявил:
«У нас в республике ситуация с коронавирусной инфекцией остается сложной. К сожалению, больные с коронавирусом выявляются среди общего населения. В некоторых случаях мы не можем найти источники инфекции. Может они среди нас, может это наши близкие».
Многие читатели в своих комментариях задаются справедливым вопросом: «Как коронавирус может «утекать» из карантинных зон?»
Ответа может только три:
1. Есть «блатные», которым удается избежать пребывания положенного 14 дневного карантина.
2. Что-то не так с тест-системами на COVID-19
3. 14-ти дневный карантин не обеспечивает гарантированного выявления больных из числа подозреваемых.
Ответ на первый вопрос не в компетенции редакции, а вот убедиться в надежности проводимых тестов на коронавирус стало интересно. Небольшую уверенность в изучении литературы придал пятилетний опыт работы в Институте иммунологии.
То, с чем удалось познакомиться в научных журналах, несколько расходится с утверждением узбекских специалистов о почти 100% точности используемых тестов, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения.
Еще в начале марта 2020 года глава ВОЗ Тедрос Гебреисус призвал страны «проводить тестирование на коронавирус SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с обратной транскрипцией, как самым точным и надежным для диагностики вирусной инфекции». ПЦР позволяет обнаружить очень малое количество генетического материала (РНК) вируса в биологическом материале человека.
Перед тем, как удостовериться в верности утверждений чиновников ВОЗ и узбекских специалистов, попробуем погрузиться в некоторые научные тонкости для того, чтобы понять принцип действия теста ПЦР.
Вирус — это микроскопическая совокупность генетического материала, окруженного молекулярной оболочкой. Генетический материал может быть представлен либо дезоксирибонуклеиновой кислотой(ДНК), либо рибонуклеиновой кислотой (РНК).
РНК обычно представляет собой состоящую из одной цепи молекулу, которая копирует, транскрибирует и передает части генетического кода белкам, чтобы они могли синтезировать и выполнять функции, которые поддерживают жизнь и развитие организмов.
ДНК — это состоящая из двух цепей молекула, которая встречается во всех организмах, таких как животные, растения и вирусы, и содержит генетический код или алгоритм того, как эти организмы строятся и развиваются.
Некоторые вирусы, в том числе и SARS-CoV-2, содержат только РНК, что означает, что они полагаются на проникновение в здоровые клетки для размножения и выживания. Оказавшись внутри клетки, вирус использует свой собственный генетический код, в данном случае РНК, чтобы взять под контроль и «перепрограммировать» клетки так, чтобы они стали фабриками по производству вирусов.
Принцип действия теста ПЦР
Для анализа берут мазок с задней стенки глотки, образец слюны или жидкости из нижних дыхательных путей (то есть мокроты). Затем образец доставляют в лабораторию, где из него выделяют РНК, содержащую геномы вирусов. После этого к смеси реагентов добавляют фермент, называемый обратной транскриптазой, который генетическую информацию РНК перекопирует в ДНК — это и есть обратная транскрипция.
Если в образце имеется участок соответствующий геному SARS-CoV-2, вирусная ДНК копируется с помощью праймеров миллионы раз. В этом случае нарабатывается много копий, которые легко определяются и анализ признают положительным. К сожалению, реакция эта достаточно сложная и требует тщательной отработки и подгонки инградиентов ( ферментов, праймеров и т.д.), а также условий проведения реакций (температуры, рН, времени и т.д.). При малейших несоответствиях указанным условиям, реакция может давать ложноположительные или ложноотрицательные результаты.
Но вот некоторое время назад в очень авторитетном научном журнале Annals of Internal Medicine, исследователи из Университета Джонса Хопкинса (на мнения ученых этого Университета сегодня равняются большинство специалистов, изучающих SARS-CoV-2) предупреждают, что использование одних только ПЦР-тестов для выявления коронавируса не особенно информативно. Ученые проанализировали семь исследований, которые включали в себя результаты 1,3 тыс. тестов.
«Согласно анализу, как минимум 20% тестов дали отрицательный результат, который оказался ложным. На самом деле пациенты были заражены, что показали дальнейшие положительные тесты. К тому же у некоторых людей, которые якобы не были заражены, были обнаружены антитела к вирусу» – объяснили исследователи.
Такие ошибки чаще всего связывают с использованием тест-систем сомнительного качества, которыми грешат многие производители. Это особенно часто проявлялось на ранних этапах пандемии.
Кроме того, ученые считают, что большую роль в достоверности тестов играет время взятия образцов. В первые три дня после заражения было почти невозможно выявить вирусы типа Sars-CoV-2. Взятые так рано анализы были практически бесполезными. Мазки, взятые на четвертый день после заражения, в 2/3 случаев также давали ложный отрицательный результат. На пятый день — когда обычно появляются первые симптомы — 40% результатов все еще были неправильными. Доля ошибочных результатов упала до 20% на восьмой день и затем постепенно уменьшалась.
Исследователи констатируют- полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что анализ следует брать примерно на восьмой день, то есть примерно через три дня после появления симптомов.
Но и тогда тесты относительно часто оказываются неудачными. Причина? Все тот же человеческий фактор — мазок мог быть взят недостаточно тщательно.
Еще одна причина может заключаться в том, что у некоторых людей присутствует мало вирусов в области носоглотки.
На основании полученных данных авторы исследования сделали вывод, что не следует исключать инфекцию только на основании отрицательного результата теста ПЦР с обратной транскрипцией. Особенно, если заражение вероятно в связи с тем, что пациент контактировал с зараженным или уже имеет типичные симптомы.
Такая вот история ПЦР тестов на коронавирус, о точности которых заявляли представители Минздрава республики.
Возможно дополнительную диагностическую информацию нам предоставит тестирование на наличие антител к Sars-CoV-2.
«Но думаю, что не нужно слепо надеяться только на результаты ПЦР-тестов или на тесты по определению антител. На последние особенно, потому, что антитела и фиксируются поздно, и возникают у переболевших не всегда. К тому же имеется перекрест с антителами от других видов коронавирусов» — считает иммунолог, профессор Петр Игнатов из США.
«Как те так и другие тесты дают большой процент ложных реакций. Это сейчас уже хорошо установленный факт, причем во всех странах, где такое тестирование проводилось. Поэтому более достоверная диагностика должна строиться на данных эпидемической ситуации, клинической картины болезни, включая КТ, рентген диагностику и др., а также данных лабораторных анализов. Только такой комплексный подход позволяет наиболее достоверно поставить диагноз на COVID-19» — пояснил П.Игнатов.
Сегодня уже точно известно, что основными разносчиками инфекции при этой болезни являются бессимптомные носители, у которых при ПЦР диагностике, в силу тех или иных причин, не выявили вирус. И это основная проблема, во всех странах, из-за которой COVID-19 стремительно распространяется по планете. Пока, наиболее эффективным методом контроля над ним, при небольшом количестве инцидентов, является — комплексная диагностика, с многократными повторными исследованиями на наличие вирусной РНК, выявление и изоляция больных и подозреваемых.
«Если же происходит массовое инфицирование населения, то как показывает опыт зарубежных стран, лабораторная диагностика уже мало что привносит в борьбу с COVID-19. Диагностика вообще уходит на второй план, так как первостепенным является борьба за жизнь пациента, независимо от того как он реагирует в тестах» — нисколько не сомневается профессор из США.
Виктор Михайлов
